目的：用于人血清中抗ENA抗体的定性筛查检测范围：检验科免疫实验室责任人：免疫实验室专业组长和实验室工作人员适应症：夏普综合症（混合性结缔组织病，MCTD），系统性红斑狼疮，干燥综合症，进行性系统性硬化症，皮肌炎/多肌炎。实验原理：该欧蒙斑点法检测试剂盒可用于人抗nRNP、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70和Jo-1等6种抗原IgG类抗体的体外定性检测。试剂盒中载片上每个反应区内固定了2条实验膜条。膜条上平行包被了经亲和层析纯化的上述抗原线。在第一次温育时，已稀释的病人标本与膜条上的抗原反应。如果标本阳性，特异性的IgG抗体（也包括IgA和IgM）将与相应抗原结合。为检测已结合的抗体，加入酶标抗人IgG（酶结合物）进行第二次温育，然后加入色原底物液以产生颜色反应。标本收集：1、最好使用新鲜血清样本，如需保存，可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。试剂准备和稳定性：所有试剂在使用前均应在室温平衡30分钟左右。从第一次使用起，试剂若2-8℃保存并且保持无污染，可稳定至所标示的有效期。载片：直接使用。为防止膜条包被有抗原的一面发生冷凝，只有当载片平衡到室温后方可打开保护袋。一旦打开保护袋，载片应立即温育，不要使用保护袋破损的载片。加样板：检查加样板是否反应区亲水而周边疏水。若不是，可用家用清洁剂清洗。阳性和阴性对照血清：直接使用。酶结合物：10倍浓缩。用干净的吸管吸取需要量用标本缓冲液1：10稀释。例如：可取30μl酶结合物用μl标本缓冲液稀释。已稀释的酶结合物应在同一个工作日用完。标本缓冲液：直接使用。清洗缓冲液：10倍浓缩。用干净的吸管吸取需要量用标本缓冲液1：10稀释。例如：可取20ml浓缩清洗缓冲液用ml蒸馏水稀释。工作浓度的清洗缓冲液应在同一个工作日用完。底物溶液：直接使用。因对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖。患者标本的准备和稳定性：标本：人血清，或EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆。稳定性：待检标本于2-8℃可稳定14天，已稀释的标本应在同一个工作日检测。标本稀释度：用标本缓冲液1：稀释，例如可取10μl血清用1.0ml标本缓冲液稀释并混匀。实验操作：滴定平板技术为了使免疫分析标准化，欧蒙发明了滴定平板技术：滴加样品至加样板反应区，然后将载片盖在加样板表面的凹槽里，载片上所有包被有抗原的膜条均与液滴接触，反应同时开始，系统的几何结构决定了液滴的位置和高度。可在一致的反应条件下同时温育任何数量的标本。加样：滴加50μl已稀释血清至加样板反应区，避免产生气泡，在开始温育前加完所有标本。温育第一次：将载片盖在加样板的凹槽里，反应即开始。确保每个标本均与载片上的膜条接触，而且标本间没有相互接触。在rmp旋转摇床上稳育30分钟。清洗：将清洗液缓冲液盛于烧杯中，流水冲洗载片后放入小杯中浸泡15分钟。加样：滴加50μl已稀释的酶结合物（碱性磷酸酶标记的抗人IgG）于加样板的每个反应区。在开始温育前加完所有反应区。温育第二次：将载片从清洗缓冲液中取出，只需擦干背部及四周后置于加样板的凹槽里。确保每个标本均与载片上的膜条接触。在rmp旋转摇床上稳育30分钟。清洗：将清洗液缓冲液盛于烧杯中，流水冲洗载片后放入小杯中浸泡15分钟。加样：滴加50μl底物液于加样板的每个反应区。在开始温育前加完所有反应区。温育第三次：将载片从清洗缓冲液中取出，只需擦干背部及四周后置于加样板的凹槽里。确保每个标本均与载片上的膜条接触。在rmp旋转摇床上稳育30分钟。清洗：用去离子水或蒸馏水冲洗载片，风干15分钟。结果判断：观察反应区内各抗原带着色的深浅。膜条上包被的抗原及其排列如下：根据膜条上个抗原带着色的深浅来判断结果。注意：必须在膜条彻底干后才能判断结果。人IgG（右边实验膜条底部的质控带）出现明显的阳性反应说明实验结果可靠。与非抗原包被区域相比，阳性反应将在相应抗原线处出现明显蓝紫色条带。抗原带着色的深浅与相应抗体的滴度相关。根据抗原带着色的深浅，可将结果分为阴性、临界阳性和阳性。抗原带着色的深浅结果无色阴性着色非常弱临界阳性着色中到较强阳性着色与质控带强度相同强阳性干扰因素：检测结果不受溶血、脂血和黄疸的影响。特异性和敏感性：该欧蒙斑点法试剂对所用抗原的特异性和敏感性均为%。参考范围：抗Sm抗体：阴性抗U1-nRNP抗体：阴性抗SS-A抗体：阴性抗SS-B抗体：阴性抗Jo-1抗体：阴性抗Scl-70抗体：阴性临床意义：1、高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率为95-%，抗体滴度与疾病活动性有关。抗U1-nRNP抗体也见于30-40%的系统性红斑狼疮患者中，但几乎总是伴有抗Sm抗体。2、抗Sm抗体对系统性红斑狼疮具有很高的特异性，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标。3、抗SS-A抗体与各种自身免疫病相关，最常见于干燥综合征，也见于系统性红斑狼疮和原发性胆汁性肝硬化。此外，在%的新生儿红斑狼疮中可出现抗SS-A抗体，抗SS-A抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。4、抗SS-B抗体几乎仅见于干燥综合征和系统性红斑狼疮的女性患者中，男女比例为29：1。在干燥综合征中抗SS-A和抗SS-B抗体常同时出现。5、抗Scl-70抗体见于进行性系统性硬化症（播散型）患者中，不出现于局限型硬化症中。6、抗Jo-1抗体见于多肌炎，常与合并肺间质纤维化相关。
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